Insuliinivalmisteiden analysointi- ja standardointimenetelmien kehittäminen ja yhtenäistäminen käänteisfaasi-korkean paineen nestekromatografialla (RP HPLC) Pihtar Anatoly Vasilyevich

  • Diagnostiikka

Väitöskirjan tulee mennä kirjastoon lähitulevaisuudessa.
Ilmoita ottamisesta

Opinnäytetyö - 480 ruplaa., Toimitus 10 minuuttia, vuorokauden ympäri, seitsemän päivää viikossa ja loma.

Tiivistelmä - 240 ruplaa, toimitus 1-3 tuntia, 10-19 (Moskovan aika), paitsi sunnuntai

Pihtar Anatoly Vasilyevich. Insuliinivalmisteiden analysointi- ja standardointimenetelmien kehittäminen ja yhtenäistäminen käänteisfaasi- korkean paineen nestekromatografialla (RP HPLC): väitöskirja. Lääketeollisuuden kandidaatti: 15.00.02 / Pihtar Anatoly Vasilievich; [Suojapaikka: Moskovan lääketieteellinen akatemia].- Moskova, 2005.- 139 s.: Il.

Väitöskirjan sisältö

LUKU 1. Kirjallisuuden tarkastelu 11

1. Insuliinin rooli diabeteksen hoidossa 11

2. Insuliinin biosynteesi ja biologinen vaikutus 12

3. Insuliinin 15 fysikaalis-kemiallisten ja farmaseuttisten ominaisuuksien yleiset ominaisuudet

4. Insuliinivalmisteet 24

5. Insuliinivalmisteiden valmistusmenetelmät, standardointi ja laadunvalvonta 31

6. HPLC: n käyttö insuliinin farmaseuttisessa analyysissä. 46

LUKU 2. Ongelmailmoitus 50

LUKU 3. Tutkimus eri tekijöiden vaikutuksesta insuliinin kromatografiseen käyttäytymiseen RP-HPLC-olosuhteissa 56

1. Menetelmät ja materiaalit 57

2. Tulosten keskustelu 62

2.1. Puskuriliuoksen 62 koostumuksen vaikutus

2.2. Natriumsulfaatin pitoisuuden vaikutus 68

2.3. Kromatografisen kolonnin lämpötilan vaikutus 70

2.4. Orgaanisen modifikaattorin 75 vaikutus

2.5. Oksastetun faasin 80 alkyyliradikaalin pituuden vaikutus

2.6. Kromatografiakolonnin 80 pituuden vaikutus

LUKU 4. Farmaseuttisten menetelmien parantaminen insuliinivalmisteiden analysoimiseksi RP HPLC 82: n perusteella

1. Optimaalisten olosuhteiden valinta insuliinin ja sen epäpuhtauksien kromatografiseen määritykseen lääkevalmisteissa 82

2. Menetelmän metrologiset ominaisuudet 84

3. Kehitettyjen menetelmien soveltaminen virallisten insuliinivalmisteiden testaamiseen 95

LUKU 5. Menetelmät isofaani-insuliinin injektoitavien annosmuotojen analysoimiseksi PF-HPLC-menetelmän perusteella 107

1. Ehdon valinta protamiinin kromatografiseen määritykseen isofaaninsuliinin 110 annosmuodoissa

2. Eri kalalajeista eristettyjen protamiinien kromatografisten profiilien tutkimus 121

3. Menetelmä protamiinin määrittämiseksi isofaani-insuliinivalmisteissa 123

4. Kehitetyn menetelmän validointi 125

Yleiset päätelmät 136

Viitteet 139

Insuliinin fysikaalis-kemiallisten ja farmaseuttisten ominaisuuksien yleiset ominaisuudet

Kemiallisesti insuliini on pieni globulaarinen proteiini, jonka molekyylipaino on enintään 6000 Da. Samalla on huomattava, että insuliini on yleinen nimi luonnollisen ja keinotekoisen alkuperän omaavien homologisten proteiinien koko perheelle, jolla on yhteinen biologinen aktiivisuus. Insuliinin proteiinilaji perustettiin vuonna 1928 [52]. Se on yksi proteiineista, jotka tuottavat biureettireaktion ja Paulin reaktion. Insuliinin rakenne oli täysin vakiintunut 50-luvun alussa. Eri alkuperää olevien insuliinien alkuaineiden kemialliselle koostumukselle on tunnusomaista taulukossa 1 annetut luvut [40].

Aminohappokoostumus. Useimmat insuliinimolekyylit sisältävät 51 aminohappotähdettä, joista 17 tunnetaan useimmissa tunnetuissa proteiineissa.

Tyypillinen piirre naudan, sian ja ihmisen insuliinin aminohappokoostumukselle on tryptofaani ja metioniini. Näiden insuliinityyppien aminohappokoostumus on esitetty taulukossa 2 [40,46].

Kaikkien insuliinityyppien varalta on kystiinin (6 puoli-kystiinitähteitä) pitoisuus. Lisäksi kaikentyyppinen insuliinimolekyyli sisältää 6 amidiryhmää (asparagiini, glutamiini).

Kun insuliinia vapautuu, pääaineksen mukana voidaan havaita insuliinin deamidoitujen muotojen fraktioita. Happamassa ympäristössä deamidaation prosessissa kaikki 6 amidiryhmää voidaan hajottaa asteittain, ja insuliinin muutosten elektroforeettinen ja kromatografinen liikkuvuus [40]. Deamidoitujen insuliinimuotojen muodostumista voidaan arvioida ammoniakin määrityksen tulosten perusteella. Insuliinin täysin amidimuodossa määritetään 6 moolia ammoniakkia 1 moolia proteiinia kohti, deamidoitujen muotojen osalta tämä arvo voi olla 5 - 0.

Insuliinin ensisijainen rakenne. Insuliinin primäärirakenne purettiin Sanger-ryhmässä 1945-1955. Käyttämällä useita kromatografisia menetelmiä, jotka mahdollistivat erilaisten peptidien, aminohappojen ja niiden johdannaisten erottamisen ja tunnistamisen, Sanger pystyi määrittämään naudan insuliinin primaarirakenteen [130,131,132,133,134,135]. Eri alkuperää olevien insuliinien jatkotutkimukset käyttäen erilaisia ​​fysikaalis-kemiallisia menetelmiä, mukaan lukien Edman-menetelmä täyden aminohapposekvenssin määrittämiseksi pitkissä peptideissä, vahvistivat Sangerin ja hänen rinnakkaislääkäriensä havainnot insuliinin rakenteesta [bb].

Tähän mennessä insuliinin ensisijainen rakenne on määritelty 24 lajin edustajissa, jotka kuuluvat neljään eläinluokkaan: nisäkkäät, linnut, kalat ja syklostomit [14]. Eri alkuperää olevan insuliinin tutkimus jatkuu [71,72,73].

Insuliinin rakenne eri eläimissä on samanlainen, mutta ei identtinen. Sen primaarirakenteessa ihmisen insuliini on samanlainen kuin sika-, koira-, siittiö- ja kani-insuliinit, jotka eroavat vain yhdestä aminohaposta [40]. Se eroaa nautaeläinten insuliinista kolmella aminohapolla. Ihmisinsuliini ei ole samanlainen kuin Guinean sikojen, lintujen ja kalojen insuliini [40]. Ihmisen, sian ja karjan insuliinien aminohapposekvenssin erot esitetään taulukossa 3.

Rakenteellisista eroista huolimatta kaikentyyppisillä insuliineilla on samanlainen biologinen aktiivisuus, ts. aiheuttaa hypoglykeemistä vaikutusta. Näytetyn biologisen aktiivisuuden suuruus riippuu kuitenkin voimakkaasti lajista ja on alueella 11 IU / mg (Pohjanmeren turska-insuliini) 62 IU / mg (kalkkuna ja kanan insuliini), kun taas ihmisinsuliinin aktiivisuus on noin 25-30 IU / mg [40]. Mitä suurempi eri alueiden väliset erot, sitä suurempi on vastaavan insuliinin biologisen aktiivisuuden ero.

Toiminnallisesti aktiivinen insuliinimolekyyli koostuu kahdesta polypeptidiketjusta (A- ja B-ketjut), jotka on kytketty disulfidisidoksilla; yksi sidos muodostuu molempien ketjujen seitsemännestä aminohappotähteestä, toinen disulfidisidos muodostuu A-ketjun 20. jäännöksestä ja B-ketjun 19. jäännöksestä (kuvio 2). Lisäksi insuliinimolekyylissä on kolmas disulfidisidos, joka on intrakaiini ja joka yhdistää kuudennen ja yhdeksännen A-ketjun tähteet [59, 117].

Toissijainen rakenne Erilaisia ​​fysikaalis-kemiallisia ja fysikaalisia tutkimusmenetelmiä käyttäen osoitettiin, että insuliinimolekyylillä on hyvin järjestetty tilarakenne (konformaatio), joka edistää tiettyjen biologisten toimintojen toteuttamista [14]. Natiivin insuliinin molekyylissä sekä cc-helix että p-fold-levyt ovat läsnä samanaikaisesti. Lisäksi on alueita, joilla on epäsäännöllinen rakenne ja rakenne <3-петли. Участки, имеющие форму а-спирали, составляют 57 %, 6 % приходится на [3-складчатую структуру, 10 % построено в виде р-петли, оставшиеся 27 % не имеют упорядоченной структуры (рисунок 3) [25].

Kun insuliinihappoliuosta (pH 2,3-2,5) kuumennetaan +100 ° C: n lämpötilassa ja jäähdytetään nopeasti -80 ° C: seen, muodostuu ns. Fibrillaarinen insuliini - hormoni on täysin inaktiivinen [27]. Fibrillaaristen insuliinikuitujen tuominen aktiivisen insuliinin liuokseen aiheuttaa spontaanin kvantitatiivisen insuliinin saostumisen fibrillien muodossa [14,17].

Insuliinivalmisteiden valmistusmenetelmät, standardointi ja laadunvalvonta

Eläinperäisten insuliinilajien saaminen. Naudanlihan ja sianlihan insuliinin teollinen tuotanto perustettiin melkein samanaikaisesti useissa maissa pian insuliinin löytämisen jälkeen vuonna 1921 [63]. Sittemmin insuliinin saamisen käsite on pysynyt lähes muuttumattomana (taulukko b) [17, 18]. Insuliinien eläinlajien tuotannossa käytettävät raaka-aineet ovat elintarvikkeisiin käytettävien teuraseläinten haima.

Insuliinin tuotannossa tärkein tehtävä on sen puhdistus - aineiden vapautuminen niihin liittyvistä epäpuhtauksista, jotka vähentävät biologista aktiivisuutta, aiheuttavat immunologisia reaktioita tai ovat potentiaalisesti vaarallisia potilaan terveydelle. Esimerkiksi useiden vuosien kuluttua, kun potilaan veressä on käytetty huonosti puhdistettua insuliinia, vasta-aineisiin voi liittyä jopa 5 000 IU: ta. Insuliinin vasta-aineet vaikuttavat merkittävästi sen vaikutukseen ja siten myötävaikuttavat diabeteksen labiiliin kulkuun.

Ensimmäinen menetelmä insuliinin puhdistamiseksi oli uudelleenkiteytys sinkkisuolojen läsnä ollessa. Vuonna 1945 osoitettiin, että insuliinin seitsenkertainen uudelleenkiteytys vähentää merkittävästi allergisten reaktioiden tasoa potilailla verrattuna virallisiin insuliinivalmisteisiin tuolloin [63].

Insuliininäytteiden heterogeenisyys kiteytymisen ja yksittäisen uudelleenkiteytyksen jälkeen esitetään käyttämällä erilaisia ​​menetelmiä: vastavirta-uutto (PE), jakautumiskromatografia (PX), ioninvaihtokromatografia (IOC), diskelektroforeesi (DEP) ja geelin poissulkukromatografia (GEC) [63].

Todettiin, että tärkeimmät samanaikaiset insuliinipitoisuudet ovat: proinsuliini, sen välituotteet, kovalenttinen insuliinidimeeri, mono-disamido-insuliini, monoarginiini ja monoeteeni sekä joukko suurimolekyylisiä yhdisteitä, joilla ei ole insuliinia. Tutkimusten tulosten yleinen johtopäätös, jossa huomioitiin havaittujen epäpuhtauksien immunologinen aktiivisuus [138], oli johtopäätös insuliiniaineiden lisäpuhdistuksen tarpeesta, joten DEF- ja GEC-menetelmiä analysoimalla löydettiin yksi komponentti - vastaava insuliini.

Insuliinin puhdistamisen ongelman ratkaisemiseksi vuonna 1950 ehdotettiin HEC-menetelmää ja vuonna 1970 anioninvaihtokromatografiaa (AOX). Todettiin, että AOX-menetelmällä puhdistettu insuliini sisältää noin 500 ppm (miljoonasosaa) epäpuhtauksia proinsuliiniaktiivisuudella [137]. Lisäpuhdistamalla insuliinia käyttäen korkean paineen nestekromatografiaa käänteisfaaseilla (RP HPLC), immunogeenisten fraktioiden pitoisuus pienenee niiden havaitsemisrajaan [63].

Katsaus insuliinin kromatografisen puhdistuksen alalla tapahtuneeseen kehitykseen on esitetty [96]. Insuliinia, joka on puhdistettu peräkkäin käyttäen IOC: ää ja GEC: tä, kutsutaan monokomponenttiseksi insuliiniksi [63]. Ihmisinsuliinin saaminen. Menetelmien etsiminen ihmisen insuliinin saamiseksi johtui kahdesta tilanteesta. Toisaalta raaka-aineongelman kiireellisyys eläininsuliinin tuotannossa toisaalta tieteen nopea kehitys tällä alueella antoi todellisen mahdollisuuden tuoda ajatus elämään. Vuonna 1979 ja 1981 melkein samanaikaisesti kehitettiin kaksi menetelmää ihmisen insuliinin saamiseksi - biosynteettiset ja puolisynteettiset [102,108]. Vuonna 1981 yhtiö Novo Nordisk aloitti ensimmäisen kerran maailmassa ihmisen puolisynteettisen insuliinin tuotannon. Yrityksen käyttämä menetelmä perustuu Al: n entsymaattiseen ja kemialliseen korvaamiseen sian insuliinimolekyylissä jäljellä olevan Tre: n kanssa [61]. Tämä menetelmä riippuu suoraan tarvittavan sian insuliinin määrän saamisesta, mikä vähentää sen taloudellista arvoa. Mahdollisuus saada ihmisen insuliinia biosynteettisellä menetelmällä ilmeni yhdistelmä-DNA-tekniikan kehittämisen yhteydessä [10]. Geneettisesti muokattujen insuliinintuotantoon liittyvät työt alkoivat noin 25 vuotta sitten. Vuonna 1978 ilmoitettiin, että saatiin E. coli -kanta, joka tuotti rotan proinsou-lingiä. Vuonna 1979 Genentechin tutkimukset kykenivät kloonaamaan aminohapposekvenssejä koodaavia geenejä E. coliin. insuliiniketjut A ja B, jotka sisältyvät pBR322-plasmidin p-halo-takidaasialueeseen [10.102]. Vuonna 1981 syntetisoitiin mini-C-proinsuliinin proinsuliinigeenianalogi, jossa 35-jäseninen C-peptidi korvattiin kuuden aminohapon segmentillä: arg-arg-gly-ser-lys-arg ja sen ilmentyminen E. colissa. Vuonna 1982 Eli Lilly aloitti maailman ensimmäisen ihmisinsuliinin teollisen tuotannon kahdella ketjuteknologialla, joka on kehitetty yhteistyössä Genentechin kanssa [102]. Tällä hetkellä on esitetty mahdollisuus saada ihmisinsuliinia erilaisten ilmentämisjärjestelmien avulla [3,10,101,102]. Taloudellisesta näkökulmasta on erityisen kiinnostavaa käyttää geneettisesti muunnettuja grampositiivisia E.coli-bakteereita, joista monet pidetään ylituottajina [3]. Samalla saavutettiin merkittävä edistyminen Saccharomices cerevisiae -hiivasoluilla [3,75]. Taulukossa 7 luetellaan tärkeimmät, yhteiset eri rekombinanttisen ihmisinsuliinin valmistusmenetelmät, teknisen prosessin vaiheet [3,10,63].

Kehitettyjen menetelmien soveltaminen virallisten insuliinivalmisteiden testaamiseen

Korkean paineen nestekromatografia (HPLC) on kolonnin nestekromatografian muunnos, jossa liikkuva faasi - eluentti - kulkee kolonnin täyttävän sorbentin läpi suurella nopeudella johtuen huomattavasta paineesta (jopa 400 x 105 Pa) kolonnin sisääntulossa [11].

Tapa, jolla analysoidaan monimutkaisia ​​aineiden seoksia, HPLC näytti hieman yli 30 vuotta sitten. Sorbenttien käyttö, jonka hiukkashalkaisija on 3–10 μm, aiheutti kromatografisen erotuksen tehokkuuden voimakkaan nousun verrattuna kolonnin nestekromatografian klassiseen versioon. Siksi HPLC: tä kutsutaan usein korkean suorituskyvyn nestekromatografiaksi (HPLC). HPLC: n käytön instrumentaalisia piirteitä kuvataan yksityiskohtaisesti lukuisissa käsikirjoissa [49.50] ja tärkeimpien farmakopean osissa [79, 150]. HPLC: ssä on kehitetty ja tuotettu laaja valikoima sorbentteja. Tutkimuksen tekijöiden [51] mukaan noin 100 yritystä maailmanlaajuisesti tuottaa yli 300 eri sorbentinimiä. Menetelmän historiaa, nykytilaa ja kehitysnäkymiä käsitellään katsauksissa [51] ja [77.78].

Erilaisissa muunnoksissaan HPLC-menetelmää käytetään laajalti farmaseuttisessa analyysissä (tuotannon valvonta ja lääkkeen laadun testaus). Menetelmä sisältyy kaikkiin maailman johtaviin farmakopöihin. Tätä menetelmää kuvataan täysin Euroopan ja Amerikan farmakopeassa. HPLC: tä käytetään lääkkeiden tunnistamiseen, puhtauden, molekyylipainon jako- koostumuksen ja kvantitatiivisen analyysin määrittämiseen. US Pharmacopoeia 28: ssa. noin 30% yksityisistä tuotteista liittyy HPLC: n käyttöön. Euroopan farmakopeassa 4. painos. tämä luku on noin 40%.

Ensimmäinen kromatografinen menetelmä insuliinikokeessa oli matalapaineinen geelinpoistonestekromatografia (GE ZhND). Erottamisen periaate HPLC-olosuhteissa perustuu eri kokoisten molekyylien erilaisiin kykyihin tunkeutua neutraalin geelin huokosiin, joka toimii kiinteänä faasina. Insuliinimonomeerin ja dimeerin hydrodynaaminen halkaisija on verrannollinen niiden molekyylipainoon ja on 2,69 ja 5,50 nm, vastaavasti [115].

Vuonna 1967 GE-IHDD-menetelmää käyttäen osoitettiin, että kiteyttämällä puhdistetut insuliinin kaupalliset valmisteet sisältävät epäpuhtauksia, joiden molekyylipaino ylittää insuliinin molekyylipainon [63]. Sian insuliinin kromatogrammeissa havaittiin kolme piikkiä, jotka tavanomaisesti osoitettiin a-, b- ja c-komponenteiksi. Sen jälkeen on ehdotettu useita kromatografisia järjestelmiä suurimolekyylisten epäpuhtauksien pitoisuuden säätämiseksi insuliinivalmisteissa. Erotus suoritettiin erittäin turpoavilla agaroosikerogeeleillä (Bio-Gel P-30, Bio-Rad Lab.) Tai dekstraanilla (Sephadex G-50, Pharmacia Fine Chemicals) käytettiin IF: tä 1-3 M etikkahapon liuosta [127]. Näiden sorbenttien suuri herkkyys puristukselle matriisin paisuntapaineen ylittävissä paineissa tekee näistä materiaaleista sopimattomia HPLC-tilassa.

Geelin poissulkemisen nestekromatografian käyttöä suurissa paineissa (GE HPLC) insuliinianalyysissä kuvattiin ensin vuonna 1980, kun oli kehitetty kovia makrohuokoisia sorbentteja, jotka ovat yhteensopivia veden kanssa ja kestävät suuria paineita. [151]: ssa erotus suoritettiin pylväillä Protein-Pak 1-125 (Waters), TSK-Gel SW 2000 (Toho Soda Corp.), Bondagel (Pharmacia) denaturointiolosuhteissa (7 M urean, mineraalihappojen ja ei-ionisen liuoksen yhdistelmä) pesuaineet). Insuliinianalyysin tarve denaturointiolosuhteissa liittyy insuliinin kykyyn aggregoitua liuokseen. Insuliinin erottamiseksi HPLC-HPLC-olosuhteissa on kuvattu myös "perinteisen" eluentin etikkahapon käyttöä [152]. Etikkahapon käytössä on useita etuja - vähäinen vaikutus erotettujen yhdisteiden luontaiseen rakenteeseen, saatavuus, alhaiset kustannukset, lisäksi tärkeä seikka on etikkahapon kyky estää insuliinin yhdistyminen.

Tällä hetkellä HPLC ghvd on farmakopean menetelmä, jolla tarkkaillaan suurimolekyylisten epäpuhtauksien pitoisuutta aineissa ja valmiissa annosmuodoissa. Menetelmää käytetään myös määrittämään protamiinin pitoisuus isofaani- insuliinivalmisteissa.

HPLC: n käyttö käänteisfaaseissa (RP HPLC) karjan ja sian insuliinin erottamiseksi ensimmäistä kertaa osoitti tämän menetelmän korkean tehokkuuden analysoimalla samanlaisen rakenteen omaavia insuliinimaisia ​​peptidejä.

Proteiinien ja polypeptidien erottamismekanismi RP-HPLC-olosuhteissa perustuu insuliinimolekyylien ja siihen liittyvien epäpuhtauksien erilaisiin hydrofobisuuksiin. Tähän mennessä on kuvattu useita kymmeniä menetelmiä eri alkuperää olevan insuliinin ja niiden johdannaisten, mukaan lukien proin-suliini, haiman polypeptidit, dezamido-johdannaiset, insuliinidimeeri, kromatografiseksi erottamiseksi. [126] osoitti mahdollisuuden erottaa kanan, kanin, lampaan ja hevosinsuliinin. Myös ihmisen, naudanlihan ja sianlihan insuliini erotettiin toisistaan. Lloyd ja Corran julkaisivat menetelmän naudanlihan, sianlihan, ihmisen insuliinien ja niiden vastaavien deamidoitujen muotojen erottamiseksi [104].

Erotus suoritetaan piihappogeeli-sorbenteilla modifioiduilla, metyyli-, butyyli-, oktyyli-, oktadekyyli- ja fenyyliryhmillä isokraattisessa tai gradienttimoodissa. PF: na käytetään orgaanisia modifioijia - asetonitriili, metyylialkoholi, isopropyylialkoholi, sekoitettuna vesipitoisten puskuriliuosten kanssa, jotka sisältävät epäorgaanisia suoloja ja ionihöyryreagensseja. Huipputunnistus suoritetaan pääasiassa spektrofotometrisellä menetelmällä aallonpituudella 190-220 nm, kuvataan myös fluorimetrisiä menetelmiä [103].

Aineen ja valmiiden insuliinimuotojen analysointi RP HPLC: llä on kuvattu yksityisissä artikkeleissa amerikkalaisessa ja Euroopan farmakopeassa [79, 150]. Menetelmää käytetään määritetyn ryhmän lääkkeiden testaamiseen "insuliinin aitouden", "siihen liittyvien proteiinien", "kvantitatiivisen määrityksen" ja "liuoksen insuliinin" suhteen.

Tutkimuskirjallisuudessa kuvataan myös ioninvaihto- ja affiniteettikromatografian käyttöä insuliinianalyysiin [44,102], mutta näitä menetelmiä ei ole laajalti käytetty farmakopeassa käytännössä.

Olosuhteiden valinta protamiinin kromatografiseen määritykseen isofaani- insuliinin annosmuodoissa

PF-ionivahvuuden lisääntyminen johtaa yleensä insuliinikapasiteettisuhteiden lisääntymiseen, joka voi johtua useista tekijöistä: - ionipitoisuuden lisääminen vähentää proteiinimolekyylin varautuneiden ryhmien ionisaatiotasoa, lisäämällä sen hydrofobisuutta / - korkeaa kationien konsentraatiota suojaa vapaita silanoliryhmiä kiinteässä pinnassa vaihe, joka heikentää proteiinin protonoitujen aminoryhmien ei-spesifistä sähköstaattista vuorovaikutusta matriisin kanssa; - korkea ionivahvuus vaikuttaa insuliinin spatiaaliseen rakenteeseen, minkä seurauksena sorbentin kanssa vuorovaikutukseen käytettävissä oleva pinta muuttuu. Epäorgaanisten suolojen pitoisuus FS: ssä vaikuttaa piikkien muotoon ja insuliinin ja desamido-Asn-insuliinin erotuksen selektiivisyyteen [143, 144]. Isokratisella eluoinnilla LiChrosorb Сів-sorbentilla 0,1 M natriumfosfaatiliuoksella (pH 2,3) saavutettiin tyydyttävä tulos vain, kun puskuriliuokseen lisättiin natriumsulfaattia konsentraatioon 0,1 M., käytä PF: ää puskuriliuosten perusteella, joiden natriumsulfaattipitoisuus on 0,2 M. Tällainen suuri natriumsulfaattipitoisuus vaikuttaa negatiivisesti kromatografiatulosten toistettavuuteen eluenttien kerrostumisen vuoksi, erittäin konsentroiduilla suolaliuoksilla on negatiivinen vaikutus kromatografisiin laitteisiin, mikä lyhentää sen käyttöikää. Ottaen huomioon, että farmakopean analyysimenetelmät kehitettiin yli 20 vuotta sitten, tuntui mielenkiintoiselta tutkia insuliinin kromatografista käyttäytymistä OF-HPLC: ssä viimeisimmän sukupolven kromatografisilla sorbenteilla, riippuen natriumsulfaatin pitoisuudesta. Samalla he yrittivät selvittää, onko PF: n natriumsulfaatin pitoisuuden väheneminen sallittua ilman kromatografisen järjestelmän erottelukyvyn merkittävää heikkenemistä. Tutkimuksen tuloksena havaittiin, että natriumsulfaatin pitoisuuden vaikutus PF: ään on erilainen siirretyn vaiheen tyypistä ja insuliinilajista riippuen. Sorbenteilla, joissa on oksastettuja ryhmiä C4 ja C ihmisen insuliinin ja desamido-Asn-ihmisen insuliinin piikkien erotuksen selektiivisyys ei riipu natriumsulfaattikonsentraatiosta. puskuriliuosta alueella 0,05 - 0,2 M. Diaspher-110-C18-sorbentilla tämän piikkiparin erotus selektiivisyys on maksimissaan 0,05 M ja minimissä 0,1 M (kaavio 4). Toisaalta insuliinin eläinlajien erottelun ja niiden vastaavien desamidoitujen AsnA21-muotojen selektiivisyys ei riipu liuoksen ionivahvuudesta, kun se erotetaan Diaspher-110-C18-sorbentilla. Sorbentilla, jossa on C8-siirretyt ryhmät, selektiivisyys nousee 1,25: stä 1,28: een lisäämällä natriumsulfaattikonsentraatiota (kuvio 4). C4-oksastettujen ryhmien sorbentilla erotusselektiivisyys naudanlihan insuliinin tapauksessa on maksimissaan 0,1 M natriumsulfaatissa ja minimissä 0,2 M: ssa. Sianlihan insuliinille ei ole ilmaistua enimmäismäärää natriumsulfaattipitoisuudessa 0,1 M, tässä tapauksessa ionisen kasvun osalta. voimat johtivat erotuksen selektiivisyyden vähenemiseen (kuvio 4). Tehokkaiden teoreettisten levyjen määrä kasvaa lisäämällä natriumsulfaattipitoisuutta. Poikkeuksena on ihmisen insuliinin käyttäytyminen sorbentissa Diasfer-110-C8 (kuva 5). Insuliinin ja desamido-Asn-insuliinin piikkien erotusaste kasvaa FS: n ionivahvuuden lisääntyessä riippumatta insuliinilajista ja oksastetun faasin tyypistä (kaavio b). Alentamalla natriumsulfaattikonsentraatiota 0,2 M: sta 0,1 M: iin valitun piikkiparin erottumisaste vähenee keskimäärin 5% ihmisen ja sian insuliinien osalta ja 10% naudan insuliinilla. Ottaen huomioon, että erotusasteen absoluuttinen arvo ylittää 2,0, kolonnin erottelukyvyn mitattu huononeminen ei mielestämme ole merkittävä. Niinpä natriumsulfaatin pitoisuus puskuriliuoksessa PF voidaan pienentää 2 kertaa verrattuna farmakopean analyysimenetelmiin.

Useimmissa tutkimuksissa proteiinien ja peptidien analysoinnista erotus suoritetaan huoneenlämpötilassa. Lisäksi jotkut tekijät osoittavat, että lämpötilan vaikutus erotuksen selektiivisyyteen on vähäinen [48]. Kuitenkin lisääntyvässä lämpötilassa kiihdytetään kiinteän ja liikkuvan faasin välistä massanvaihtoprosessia, mikä johtaa peptidien retentioajan vähenemiseen ja piikkien supistumiseen.

Insuliini on standardoitu

Haima on yksi tärkeimmistä elimistä, joilla on kaksoiseritys - sisäinen ja ulkoinen.
Sisäisen erityksen tuote on insuliini, jolla on tärkeä rooli hiilihydraattien aineenvaihdunnassa. Insuliini on tuote, joka muodostuu erityisistä soluista, jotka on ryhmitelty niin sanottuihin Langerhansin saariin.

Ulkoinen salaisuus on haiman mehu, joka sisältää trypsiiniä - yksi tärkeimmistä ruoansulatusentsyymeistä, jonka erittävät rauhaset, jotka muodostavat haiman päämassaa. Trypsiini on tärkein osa pankreatiinivalmistetta.
Insuliini (Insulinum). Insuliini eristettiin puhtaana vuonna 1921. Sen valmistukseen on paljon menetelmiä, ne eroavat toisistaan ​​lähinnä vain yksityiskohtaisesti.

Koska insuliinin lisäksi trypsiini sisältää entsyymiä, joka rikkoo insuliinia melko helposti, ensimmäiset yritykset saada insuliinia haimasta epäonnistuivat. Siksi yritimme saada sen rauhasesta, jossa tämä entsyymi puuttuisi, esimerkiksi kalojen tai intrauteriinisten vasikoiden rauhasista. Mutta myös näillä yrityksillä tuotannon menestykseen ei ollut, koska kaloissa rauhasen koko on hyvin pieni ja itse rauhan erittyminen on teknisesti vaikeaa toteuttaa; suurten määrien sisäpuolisissa vasikoissa olevien rauhasien erottaminen tuotantoa varten aiheuttaa huomattavia vaikeuksia.
Lopuksi, vuonna 1922 kokeet kypsän karjan rauhasella osoittivat, että kun käytetään happamoitunutta vahvaa alkoholia, entsyymit (trypsiini jne.) Inaktivoidaan ja menettävät kyvyn tuhota insuliinia.

Tuotantotekniikka. Insuliinin tuotannossa käytetään jäädytettyä tai tuoretta haimaa pääasiassa karjasta ja sioista.
Murskaamiseen. Jotta vältettäisiin hormonin tuhoutuminen trypsiinillä, tuoreet rauhaset viimeistään 30 minuutin kuluttua eläimen teurastuksesta on puhdistettava vierekkäisistä kudoksista, murskattu lihamyllyssä.

Louhinta. Murskautuneet rauhaset kaadetaan 95% alkoholiin, tehdään happamaksi rikkihapolla (1 osa rauhasesta on 1,5 osaa 95 ° alkoholia ilman aldehydejä + 0,5% rikkihappoa tai suolahappoa). Seosta uutetaan jäähdyttämällä 1,5 tuntia jatkuvasti sekoittaen.
Ensimmäinen uute poistetaan, jäännös puristetaan tai sentrifugoidaan. Uutto uutetaan jälleen 1 tunnin 60 ° alkoholilla (eikä 95 °, koska raaka-aineessa ei ole kosteutta) - yksi osa rauhasesta ottaa osan alkoholista. Molemmat uutteet valutetaan yhteen ja suodatetaan levyn läpi.

Painolastiproteiinien poistaminen. Saadusta uutteesta proteiinit poistetaan eri tavoin:
1) asettumalla kylmään (-4 - 0 ° С) 48 tunnin kuluessa.
2) lisätään uutteeseen natriumhydroksidiliuos pH-arvoon 6,6 - 6,8 (joissakin tapauksissa - pH = 6,4 - 6,6).

Saostus erotetaan käyttämällä sentrifugia, suodatusta tai sedimentaatiota.
Haihdutus ja rasvanpoisto. Saatu kirkas neste tehdään happamaksi puhtaalla rikkihapolla pH-arvoon 2,5 ja haihdutetaan 1/10: aan tilavuudesta lämpötilassa, joka on korkeintaan 40 ° C.
Kun kaikki alkoholi on poistettu, neste rasvataan.

Suolaus ja puhdistus. Rasvattomaan suodokseen lisätään ammoniumsulfaattia kyllästymiseen, minkä jälkeen syntyy insuliinia, jossa on pieni määrä painolastiaineita, muodostaen raakaa insuliiniraaka-ainetta, joka poistetaan ja kuivataan, ja sitten rasvanpoisto alkoholi- eetteriseoksella.
Rasvattu insuliini kuivataan ympäristön olosuhteissa ja jauhetaan jauheeksi. Haihdutusjauheet puhdistetaan edelleen, jolloin saadaan kiteistä insuliinia, joka sisältää vähintään 22 U 1 mg: ssa.
Standardointi. Saatu insuliini on valkoinen tai hieman harmahtava jauhe. Se liukenee veteen ja vesipitoiseen alkoholiliuokseen, jonka lämpötila on enintään 80 °, mutta liukenematon alkoholiin, jossa linnoitus on yli 90 °. Kun insuliini liuotetaan veteen, saadaan joko väritön tai hieman kellertävä neste.

Säilytystä varten liuokseen lisätään 0,3% trikresolia tai fenolia, ja sille suoritetaan biologinen standardointi. Kun insuliinia injektoidaan kaneisiin, niiden hiilihydraattipitoisuus veressä 1,5–5 h laskee keskimäärin 50% eli 0,09%: sta 0,045%: iin (katso Farmakopea, 9. painos). Vastaavaa annosta kutsutaan yhdeksi kaniyksiköksi, joka on yhtä suuri kuin kolme ihmistä tai kolme kliinistä.
Pakkaus. Liuos johdetaan bakteerisuodattimen läpi. Sitten suodos kaadetaan aseptiseen asentoon 5 tai 10 ml: n pulloihin kussakin millilitrassa insuliiniliuosta, joka sisältää 40 tai 80 U.

Pullot suljetaan kumitulpilla, jotka on rullattu alumiinikorkilla.
Pulloon ja laatikkoon on merkitty etiketit pullojen kanssa, joissa on ilmoitettava valmistus, valmistuspäivä, säilyvyysaika jne.

Ennen kuin käytät insuliinia, alumiinikorkki avataan, pyyhitään alkoholilla, sitten korkki puhkaistaan ​​steriilillä neulalla ja tarvittava määrä nestettä imetään ruiskuun, joka injektoidaan ihon alle tai lihakseen.
Varastointi. Insuliinia säilytetään injektiopulloissa. Kestoaika on 18 kuukautta lämpötilassa, joka on korkeintaan 10 ° C, koska korkeammassa lämpötilassa insuliini voi osittain menettää aktiivisuutensa.

Ulkoiset merkit soveltumattomuudesta: liuoksen tai saostumisen pilaantuminen, muotin ulkonäkö mikro-organismipulloissa tai pesäkkeissä.

Farmakologinen ryhmä - insuliinit

Alaryhmien valmisteita ei oteta huomioon. mahdollistaa

kuvaus

Insuliini (latinalaiselta. Insula-saareke) on Langerhansin haiman saarekkeiden β-solujen tuottama proteiinipeptidi- hormoni. Fysiologisissa olosuhteissa β-solut insuliini muodostuu preproinsuliinista, joka on yksiketjuinen prekursoriproteiini, joka koostuu 110 aminohappotähteestä. Kun karkea endoplasminen reticulum siirretään membraanin läpi, 24 aminohapposignaalipeptidi pilkotaan preproinsuliinista ja muodostuu proinsuliini. Golgin laitteessa oleva proinsuliinin pitkä ketju pakataan rakeisiin, joissa hydrolyysin tuloksena neljä pää aminohappotähdettä irrotetaan insuliinin ja C-terminaalisen peptidin muodostamiseksi (C-peptidin fysiologinen funktio ei ole tiedossa).

Insuliinimolekyyli koostuu kahdesta polypeptidiketjusta. Yksi niistä sisältää 21 aminohappotähdettä (ketju A), toinen - 30 aminohappotähdettä (ketju B). Ketjut yhdistetään kahdella disulfidisillalla. Kolmas disulfidisilta muodostuu ketjun A sisään. Insuliinimolekyylin kokonaismolekyylipaino on noin 5700. Insuliinin aminohapposekvenssiä pidetään konservatiivisena. Useimmilla lajeilla on yksi insuliinigeeni, joka koodaa yhtä proteiinia. Poikkeuksena ovat rotat ja hiiret (niillä on kaksi insuliinigeeniä), ne tuottavat kaksi insuliinia, jotka eroavat kahdesta B-ketjun aminohappotähteestä.

Insuliinin ensisijainen rakenne erilaisissa biologisissa lajeissa, mm. ja eri nisäkkäissä, hieman erilaisissa. Ihmisinsuliinin rakenteelle lähimpänä on sian insuliini, joka eroaa ihmisen aminohaposta (sillä on ketjussa B oleva alaniinitähde aminohappotähteen treoniinin sijasta). Naudan insuliini eroaa ihmisen kolmesta aminohappotähteestä.

Historiallinen tausta. Vuonna 1921 Frederick G. Banting ja Charles G. Best, jotka työskentelivät John J. R. McLeodin laboratoriossa Toronton yliopistossa, poimivat uutteen haimasta (kuten myöhemmin osoittautui sisältäväksi amorfista insuliinia), joka pienensi veren glukoositasoa koirilla kokeellinen diabetes. Vuonna 1922 ensimmäisestä potilaasta, 14-vuotiaasta Leonard Thompsonista, joka sai diabeteksen, ruiskutettiin haimauutetta, mikä pelasti hänen elämänsä. James B. Collip kehitti vuonna 1923 haiman puhdistetun uutteen, joka myöhemmin sallii aktiivisten uutteiden valmistamisen sikojen ja nautojen haiman rauhasista, jotka tuottavat toistettavia tuloksia. Vuonna 1923 Banting ja McLeod saivat Nobelin fysiologian ja lääketieteen palkinnon insuliinin löytämisestä. Vuonna 1926 J. Abel ja V. Du-Vigno saivat insuliinin kiteisessä muodossa. Vuonna 1939 FDA (Food and Drug Administration) hyväksyi ensimmäisen kerran insuliinin. Frederick Sanger selvitti täysin insuliinin aminohapposekvenssin (1949–1954), ja vuonna 1958 Sanger sai Nobelin palkinnon työstään proteiinien, erityisesti insuliinin, rakenteen selvittämiseksi. Vuonna 1963 syntetisoitiin keinotekoinen insuliini. FDA hyväksyi ensimmäisen rekombinanttisen ihmisinsuliinin vuonna 1982. FDA hyväksyi vuonna 1996 analogisen ultraäänilääkettä vaikuttavan insuliinin (lispro-insuliini).

Toimintamekanismi. Insuliinin vaikutusten toteuttamisessa johtava rooli on sen vuorovaikutuksessa solun plasmamembraaniin paikallisten spesifisten reseptorien kanssa ja insuliinireseptorikompleksin muodostumiseen. Yhdessä insuliinireseptorin kanssa insuliini tulee soluun, jossa se vaikuttaa soluproteiinien fosforylaatioon ja laukaisee lukuisia solunsisäisiä reaktioita.

Nisäkkäissä insuliinireseptoreita esiintyy lähes kaikissa soluissa, sekä klassisissa insuliinikohtaisissa soluissa (hepatosyytit, myosyytit, liposyytit) että verisoluilla, aivojen ja sukupuolirauhasilla. Eri soluissa olevien reseptorien määrä vaihtelee 40: stä (erytrosyytistä) 300 000: een (hepatosyytit ja liposyytit). Insuliinireseptori syntetisoidaan jatkuvasti ja hajoaa, sen puoliintumisaika on 7-12 tuntia.

Insuliinireseptori on suuri transmembraaninen glykoproteiini, joka koostuu kahdesta a-alayksiköstä, joiden molekyylipaino on 135 kDa (kukin sisältää 719 tai 731 aminohappotähdettä riippuen mRNA: n silmukoinnista) ja kahdesta p-alayksiköstä, joiden molekyylipaino on 95 kDa (620 aminohappotähdettä). Alayksiköt on kytketty toisiinsa disulfidisidoksilla ja muodostavat heterotetrameerisen rakenteen P-a-a-P. Alfa-alayksiköt sijaitsevat solunulkoisesti ja sisältävät insuliinia sitovia kohtia, jotka ovat reseptorin tunnistusosa. Beta-alayksiköt muodostavat transmembraanidomeenin, omistavat tyrosiinikinaasiaktiivisuuden ja suorittavat signaalin muuntamisen tehtävän. Insuliinin sitoutuminen insuliinireseptorin a-alayksikköön johtaa β-alayksiköiden tyrosiinikinaasiaktiivisuuden stimulointiin autofosforyloimalla niiden tyrosiinitähteet, a-, p-heterodimeerien aggregaatio ja hormone-reseptorikompleksien nopea sisäistyminen tapahtuu. Aktivoitu insuliinireseptori aloittaa biokemiallisten reaktioiden kaskadin, mm. muiden proteiinien fosforylaatio solussa. Ensimmäinen näistä reaktioista on neljän proteiinin fosforylaatio, jota kutsutaan insuliinireseptorin substraateiksi (insuliinireseptorin substraatti), IRS-1, IRS-2, IRS-3 ja IRS-4.

Insuliinin farmakologiset vaikutukset. Insuliini vaikuttaa lähes kaikkiin elimiin ja kudoksiin. Sen tärkeimmät kohteet ovat kuitenkin maksa, lihakset ja rasvakudos.

Endogeeninen insuliini on tärkein hiilihydraattiaineenvaihdunnan säätelijä, eksogeeninen insuliini on spesifinen sokeria vähentävä aine. Insuliinin vaikutus hiilihydraatin aineenvaihduntaan johtuu siitä, että se parantaa glukoosikuljetusta solukalvon läpi ja sen hyödyntämistä kudoksissa, edistää glukoosin muuttumista glykogeeniksi maksassa. Insuliini estää lisäksi glukoosin endogeenisen tuotannon tukahduttamalla glykogenolyysin (glykogeenin hajoaminen glukoosiksi) ja glukoneogeneesin (glukoosin synteesi ei-hiilihydraattilähteistä - esimerkiksi aminohapoista, rasvahapoista). Hypoglykemisen lisäksi insuliinilla on useita muita vaikutuksia.

Insuliinin vaikutus rasva-aineenvaihduntaan ilmenee lipolyysin estämisenä, mikä johtaa vapaiden rasvahappojen virtauksen vähenemiseen verenkiertoon. Insuliini estää ketonirunkojen muodostumisen kehoon. Insuliini lisää rasvahappojen synteesiä ja niiden seuraavaa esteröintiä.

Insuliini on mukana proteiinien metaboliassa: se lisää aminohappojen kulkeutumista solukalvon läpi, stimuloi peptidisynteesiä, vähentää kudosten kulutusta proteiineissa ja estää aminohappojen muuttumisen ketohappoiksi.

Insuliinin vaikutukseen liittyy useiden entsyymien aktivoituminen tai estäminen: glykogeenisyntetaasi, pyruvaatti-dehydrogenaasi, heksokinaasi stimuloidaan, lipaasit (ja rasvakudoksen lipidien hydrolysointi ja lipoproteiini-lipaasi, jotka vähentävät seerumin sameutta sen jälkeen, kun ravinto on runsaasti rasvaa).

Haiman biosynteesin ja insuliinin erittymisen fysiologisessa säätelyssä glukoosin pitoisuus veressä on tärkeä: sen sisällön kasvaessa insuliinin eritys lisääntyy ja lasku hidastuu. Insuliinin erittymistä glukoosin lisäksi vaikuttavat elektrolyytit (erityisesti Ca2 + -ionit), aminohapot (mukaan lukien leusiini ja arginiini), glukagoni, somatostatiini.

Farmakokinetiikkaa. Insuliinivalmisteita injektoidaan s / c, lihaksensisäisesti tai laskimonsisäisesti (in / in, vain lyhytvaikutteiset insuliinit, ja vain diabeettisessa prekoomissa ja koossa). Insuliinisuspensioihin ei ole mahdollista syöttää. Insuliinin lämpötilan tulee olla huoneenlämpötilassa kylmä insuliini imeytyy hitaammin. Optimaalisin tapa jatkuvaan insuliinihoitoon on kliininen käytäntö.

Imeytymisen täydellisyys ja insuliinivaikutuksen puhkeaminen riippuvat pistoskohdasta (yleensä insuliinia injektoidaan vatsaan, reisiin, pakariin, ylävarteen), annokseen (injektoitavan insuliinin tilavuuteen), insuliinin pitoisuuteen valmisteessa jne.

Insuliinin imeytyminen verenkiertoon pistoskohdasta riippuu useista tekijöistä, kuten insuliinista, pistoskohdasta, paikallisesta veren virtausnopeudesta, paikallisesta lihasaktiivisuudesta, injektoidun insuliinin määrästä (enintään 12–16 U lääkettä suositellaan pistettäväksi yhteen paikkaan). Nopeasti, insuliini tulee veren anteriorisen vatsan seinän ihonalaisesta kudoksesta, hitaammin olkapäästä, reiden etupinnasta ja jopa hitaammin alavyöhykkeestä ja pakarasta. Tämä johtuu lueteltujen alueiden ihonalaisen rasvakudoksen verisuonittumisesta. Insuliinin toimintaprofiili vaihtelee merkittävästi sekä eri ihmisissä että samassa henkilössä.

Veressä insuliini sitoutuu alfa- ja beeta-globuliineihin, tavallisesti 5–25%, mutta sitoutuminen voi lisääntyä hoidon aikana seerumin vasta-aineiden esiintymisen vuoksi (eksogeenisen insuliinin vasta-aineiden tuotanto johtaa insuliiniresistenssiin; nykyaikaisen erittäin puhdistettujen valmisteiden avulla insuliiniresistenssiä esiintyy harvoin ). T1/2 veren määrä on alle 10 min. Suurin osa verenkiertoon vapautuvasta insuliinista hajoaa proteolyyttisesti maksassa ja munuaisissa. Se erittyy nopeasti munuaisissa (60%) ja maksassa (40%); alle 1,5% erittyy virtsaan muuttumattomana.

Tällä hetkellä käytettävät insuliinivalmisteet vaihtelevat monella tavalla, mukaan lukien alkulähteen, vaikutuksen keston, liuoksen pH: n (hapan ja neutraalin), säilöntäaineiden (fenoli, kresoli, fenolikresoli, metyyliparabeeni), insuliinipitoisuuden - 40, 80, 100, 200, 500 U / ml läsnäolon mukaan.

Luokittelu. Insuliinit luokitellaan yleensä alkuperän mukaan (nautaeläimet, sika, ihminen sekä ihmisinsuliinin analogit) ja vaikutuksen kesto.

Tuotantolähteistä riippuen erotetaan eläinperäiset insuliinit (lähinnä sian insuliinivalmisteet), puolisynteettiset ihmisinsuliinivalmisteet (jotka on saatu sian insuliinista entsymaattisella transformaatiolla), ihmisen insuliinivalmisteita (geenitekniikan tuottama DNA-rekombinantti).

Lääketieteelliseen käyttöön insuliinia oli aikaisemmin saatu pääasiassa karjan haimasta, sitten sikojen haimasolusta, koska sian insuliini on lähempänä ihmisen insuliinia. Koska naudan insuliini, joka poikkeaa ihmisen kolmesta aminohaposta, aiheuttaa usein allergisia reaktioita, nykyään sitä ei käytännössä käytetä. Sian insuliini, joka eroaa ihmisen yhdestä aminohaposta, aiheuttaa vähemmän allergisia reaktioita. Insuliinilääkevalmisteissa, jos puhdistusta ei ole riittävästi, voi esiintyä epäpuhtauksia (proinsuliini, glukagoni, somatostatiini, proteiinit, polypeptidit), jotka voivat aiheuttaa erilaisia ​​sivureaktioita. Nykyaikaiset tekniikat mahdollistavat puhdistetun (monokromatografisesti puhdistetun insuliinin "piikin" vapautumisen), erittäin puhdistetun (monokomponenttinen) ja kiteytyneiden insuliinivalmisteiden saamisen. Eläinperäisen insuliinin valmisteista etusija annetaan sikojen haimasta johdetulle mono-piikin insuliinille. Geenitekniikalla saatu insuliini on täysin yhdenmukainen ihmisinsuliinin aminohappokoostumuksen kanssa.

Insuliiniaktiivisuus määritetään biologisella menetelmällä (sen kyvyn alentaa veren glukoosia kaneilla) tai fysikaalis-kemiallisella menetelmällä (elektroforeesilla paperilla tai kromatografialla paperilla). Yhden toimintayksikön tai kansainvälisen yksikön aktiivisuus on 0,04082 mg kiteistä insuliinia. Ihmisen haima sisältää enintään 8 mg insuliinia (noin 200 U).

Insuliinivalmisteet on jaettu lyhyt- ja ultraäänilääkkeisiin, jotka jäljittelevät haiman normaalia fysiologista erittymistä vasteena stimulaatioon, keskipitkän keston lääkkeisiin ja pitkävaikutteisiin lääkkeisiin - jäljittelevät perus- (tausta) insuliinin eritystä sekä yhdistettyjä lääkkeitä (yhdistävät molemmat toimet).

Seuraavia ryhmiä on:

Ultrasorttivaikutteiset insuliinit (hypoglykeminen vaikutus kehittyy 10–20 minuuttia s / c-injektion jälkeen, toiminnan huippu saavutetaan keskimäärin 1-3 tunnin kuluttua, vaikutuksen kesto on 3-5 tuntia):

- lisproinsuliini (Humalog);

- aspartinsuliini (NovoRapid Penfill, NovoRapid FlexPen);

- glulisinsuliini (apidra).

Lyhytvaikutteiset insuliinit (vaikutuksen alkaminen yleensä 30–60 minuutin kuluttua; maksimaalinen vaikutus 2–4 tunnin kuluttua; vaikutuksen kesto 6–8 tuntia):

- liukoinen insuliini [ihmisen geenitekniikka] (Actrapid HM, Gensulin R, Rinsulin R, Humulin Regular);

- liukoinen insuliini [ihmisen puolisynteettinen] (Biogulin R, Humodar R);

- liukoinen insuliini [sian monokomponentti] (Actrapid MS, Monodar, Monosuinsulin MK).

Pitkävaikutteiset insuliinivalmisteet - sisältävät lääkkeitä, joilla on keskimääräinen vaikutusaika ja pitkävaikutteisia lääkkeitä.

Keskipitkän vaikutuksen omaavat insuliinit (alkavat 1,5–2 tunnin kuluttua; huippu 3–12 tunnin kuluttua; kesto 8–12 h):

- Insuliinisofaani [ihmisen geenitekniikka] (Biosuliini N, Gansuliini N, Gensuliini N, Insuman Bazal GT, Insuran NPH, Protafan NM, Rinsuliini NPH, Humulin NPH);

- insuliinisofaani [ihmisen puolisynteettinen] (Biogulin N, Humodar B);

- insuliini-isofaani [sian monokomponentti] (Monodar B, Protafan MS);

- sinkkiyhdisteen insuliinisuspensio (Monotard MS).

Pitkävaikutteiset insuliinit (alkavat 4–8 tunnin kuluttua; huippu 8–18 tunnin kuluttua; kokonaiskesto 20–30 h):

- glargiininsuliini (Lantus);

- detemirinsuliinia (Levemir Penfill, Levemir FlexPen).

Yhdistetyt insuliinivalmisteet (kaksivaiheiset valmisteet) (hypoglykeminen vaikutus alkaa 30 minuuttia s / c-annon jälkeen, saavuttaa maksimiarvon 2–8 tunnin kuluttua ja kestää jopa 18–20 tuntia):

- kaksivaiheinen insuliini [ihmisen puolisynteettinen] (Biogulin 70/30, Humodar K25);

- kaksivaiheinen insuliini [ihmisen geneettisesti muokattu] (Gansulin 30P, Gensulin M 30, Insuman Comb 25 GT, Mikstaard 30 NM, Humulin M3);

- aspartinsuliinin kaksivaiheinen (Novomix 30 Penfill, Novomix 30 FlexPen).

Ultrasorttivaikutteiset insuliinit ovat ihmisen insuliinianalogeja. On tunnettua, että endogeeninen insuliini haiman β-soluissa sekä hormone- molekyylit valmistetuissa lyhytvaikutteisen insuliinin liuoksissa polymeroidaan ja ovat heksameerejä. Kun s / c-anto heksameeriset muodot imeytyvät hitaasti ja hormonin huippupitoisuus veressä, samanlainen kuin terveellä ihmisellä syömisen jälkeen, ei ole mahdollista luoda. Lisproinsuliini oli ensimmäinen lyhytvaikutteinen insuliinianalogi, joka imeytyy ihonalaisesta kudoksesta 3 kertaa nopeammin kuin ihmisen insuliini. Lisproinsuliini on ihmisen insuliinijohdannainen, joka on saatu vaihtamalla insuliinimolekyylissä kaksi aminohappotähdettä (lysiini ja proliini B-ketjun asemissa 28 ja 29). Insuliinimolekyylin modifiointi häiritsee heksameerien muodostumista ja antaa lääkkeen nopean virtauksen verelle. Melkein välittömästi kudosten s / c-injektion jälkeen heksameerien muodossa olevat lisproinsuliinimolekyylit hajoavat nopeasti monomeereiksi ja tulevat veriin. Toinen insuliinianalogi - aspartinsuliini - luotiin korvaamalla proliini asemassa B28 negatiivisesti varautuneella asparagiinihapolla. Lisproinsuliinin tapaan se injektoinnin jälkeen hajoaa nopeasti monomeereiksi. Glulisinsuliinissa aminohapon asparagiini-ihmisinsuliinin korvaaminen lysiinin ja lysiinin asemassa B3 glutamiinihapon asemassa B29 edistää myös nopeampaa imeytymistä. Ultrashort-vaikuttavia insuliinianalogeja voidaan antaa välittömästi ennen ateriaa tai aterian jälkeen.

Lyhytvaikutteiset insuliinit (kutsutaan myös liukoisiksi) ovat liuoksia puskurissa, jossa on neutraaleja pH-arvoja (6,6–8,0). Ne on tarkoitettu ihon alle, harvemmin - lihakseen. Tarvittaessa niitä annetaan myös suonensisäisesti. Niillä on nopea ja suhteellisen lyhyt hypoglykeeminen vaikutus. Vaikutus ihonalaisen injektion jälkeen tapahtuu 15–20 minuutin kuluttua, saavuttaa maksimiarvon 2 tunnin kuluttua; toiminnan kesto on noin 6 tuntia, ja niitä käytetään pääasiassa sairaalassa potilaan tarvitseman insuliiniannoksen määrittämisen aikana ja myös silloin, kun tarvitaan nopeaa (kiireellistä) vaikutusta - diabeettisessa koomassa ja precomassa. T: n käyttöönotossa1/2 on 5 min, joten diabeettisella ketoasidoidisella koomalla insuliinia annetaan tipoittain. Lyhytvaikutteisia insuliinivalmisteita käytetään myös anabolisina aineina ja niitä määrätään yleensä pieninä annoksina (4-8 IU 1–2 kertaa päivässä).

Keskipitkän vaikutuksen omaavat insuliinit ovat vähemmän liukoisia, ne imeytyvät hitaammin ihonalaisesta kudoksesta, minkä seurauksena niillä on pidempi vaikutus. Näiden lääkkeiden pitkäaikainen vaikutus saavutetaan läsnä ollessa erityisellä pidentäjällä - protamiinilla (isofaani, protapaani, basaali) tai sinkillä. Insuliinin imeytymisen hidastuminen valmisteissa, jotka sisältävät sinkkiyhdisteen insuliinisuspensiota, johtuen sinkkikiteistä. NPH-insuliini (neutraali protamiini Hagedorn tai isofaani) on suspensio, joka koostuu insuliinista ja protamiinista (protamiini on kalanmaidosta eristetty proteiini) stökiometrisessä suhteessa.

Pitkävaikutteiset insuliinit sisältävät glargiininsuliinin - ihmisen insuliinin analogin, joka on saatu DNA-rekombinanttitekniikalla - ensimmäinen insuliinilääke, jolla ei ole voimakasta huippua. Glargiini-insuliini saadaan insuliinimolekyylissä kahdella muunnoksella: korvaamalla A-ketju (asparagiini) glysiinillä asemassa 21 ja kiinnittämällä kaksi arginiinitähteitä B-ketjun C-päähän. Lääkeaine on kirkas liuos, jonka pH on 4. Happama pH stabiloi insuliiniheksameerejä ja antaa lääkkeen pitkän ja ennustettavan imeytymisen ihonalaisesta kudoksesta. Hapan pH: n vuoksi glargiinin insuliinia ei kuitenkaan voida yhdistää lyhytvaikutteisiin insuliineihin, joilla on neutraali pH. Yksi glargininsuliinin injektio tarjoaa 24 tunnin ei-huippu-glykeemisen kontrollin. Useimmilla insuliinivalmisteilla on ns. "Peak" -toiminto, todetaan, kun insuliinin pitoisuus veressä saavuttaa maksimiarvon. Glargiini-insuliinilla ei ole voimakasta huippua, koska se vapautuu verenkiertoon suhteellisen vakionopeudella.

Pitkäaikaisen vaikutuksen omaavia insuliinivalmisteita on saatavilla erilaisissa annostusmuodoissa, joiden hypoglykeeminen vaikutus on erilainen (10 - 36 tuntia). Pitkäaikainen vaikutus vähentää päivittäisten injektioiden määrää. Ne valmistetaan tavallisesti suspensioina, joita annetaan vain ihonalaisesti tai lihaksensisäisesti. Diabeettisessa koomassa ja pre-comatose-tilassa pitkittyneitä lääkkeitä ei käytetä.

Yhdistetyt insuliinivalmisteet ovat suspensioita, jotka koostuvat neutraalista liukoisesta lyhytvaikutteisesta insuliinista ja insuliini-isofaanista (keskimääräinen vaikutusaika) tietyissä suhteissa. Tämä erilaisen kestoisen insuliinin yhdistelmä yhdessä valmisteessa antaa potilaalle mahdollisuuden säästää kahdella injektiolla lääkkeiden erillisellä käytöllä.

Merkkejä. Insuliinin käytön pääasiallinen käyttöaihe on tyypin 1 diabetes mellitus, mutta tietyissä olosuhteissa se on määrätty myös tyypin 2 diabetes mellituslääkkeelle. joilla on resistenssi suun kautta annettaviin hypoglykemisiin aineisiin, joilla on vakavia samanaikaisia ​​sairauksia, valmisteltaessa kirurgisia toimenpiteitä, diabeettinen kooma, diabetes raskaana oleville naisille. Lyhytvaikutteisia insuliineja käytetään paitsi diabeteksessa, myös joissakin muissa patologisissa prosesseissa, esimerkiksi yleisessä uupumuksessa (anabolisena aineena), furunkuloosina, tyrotoksikoosina, mahalaukussa (atonia, gastroptosis), kroonisessa hepatiitissa ja maksakirroosin ensisijaisissa muodoissa sekä eräissä mielenterveysongelmissa (suurten insuliiniannosten antaminen - niin sanottu hypoglykeminen kooma); sitä käytetään joskus osana "polarisoivia" liuoksia, joita käytetään akuutin sydämen vajaatoiminnan hoitoon.

Insuliini on diabetes mellituksen pääasiallinen spesifinen hoito. Diabetes mellituksen hoito suoritetaan erityisesti kehitettyjen menetelmien mukaisesti, jotka käyttävät insuliinivalmisteita, joilla on erilainen vaikutusaika. Lääkkeen valinta riippuu taudin kulun vakavuudesta ja ominaisuuksista, potilaan yleisestä tilasta ja lääkkeen sokeria alentavan vaikutuksen alkamisen nopeudesta ja kestosta.

Kaikkia insuliinivalmisteita käytetään pakollisena ravitsemusjärjestelmän noudattamisenä rajoittamalla elintarvikkeen energia-arvoa (1700–3 000 kcal).

Insuliinin annosta määritettäessä ne ohjataan paastoarvon glukoosin ja päivän aikana sekä glykosurian tasosta päivän aikana. Lopullinen annoksen valinta suoritetaan hyperglykemian, glykosurian ja potilaan yleisen tilan vähentämisen alaisuudessa.

Vasta. Insuliini on vasta-aiheinen hypoglykemian yhteydessä esiintyviin sairauksiin ja tiloihin (esimerkiksi insuliiniin), maksan akuutteihin sairauksiin, haimaan, munuaisiin, mahalaukun ja pohjukaissuolihaavojen, dekompensoituneiden sydänvikojen, akuutin sepelvaltimon vajaatoiminnan ja joidenkin muiden sairauksien hoitoon.

Käyttö raskauden aikana. Diabetes mellituksen pääasiallinen lääkehoito raskauden aikana on insuliinihoito, joka suoritetaan tarkassa valvonnassa. Jos kyseessä on tyypin 1 diabetes, insuliinihoitoa jatketaan. Jos kyseessä on tyypin 2 diabetes, suun kautta otettavat hypoglykeemiset lääkkeet peruutetaan ja ruokavalio hoidetaan.

Raskausdiabetes mellitus (raskaana oleva diabetes) on hiilihydraattiaineenvaihdunnan häiriö, joka esiintyi ensimmäisen kerran raskauden aikana. Raskausdiabetes mellitus liittyy lisääntyneeseen perinataalisen kuolleisuuden riskiin, synnynnäisten epämuodostumien esiintyvyyteen sekä diabeteksen etenemisen riskiin 5–10 vuotta luovutuksen jälkeen. Raskausdiabeteksen hoito alkaa ruokavaliosta. Jos ruokavalion hoito on tehotonta, käytetään insuliinia.

Potilaille, joilla on aikaisemmin olemassa oleva tai raskaudellinen diabetes, on tärkeää ylläpitää aineenvaihduntaprosessien riittävä säätely raskauden aikana. Insuliinin tarve voi laskea raskauden ensimmäisen kolmanneksen aikana ja lisääntyä toisella ja kolmannella kolmanneksella. Synnytyksen ja välittömästi sen jälkeen insuliinin tarve voi laskea dramaattisesti (hypoglykemian riski kasvaa). Näissä olosuhteissa veren glukoosin tarkka seuranta on välttämätöntä.

Insuliini ei läpäise istukan estettä. Kuitenkin äidin IgG-vasta-aineet insuliinille kulkevat istukan läpi ja aiheuttavat todennäköisesti hyperglykemiaa sikiössä neutraloimalla siitä erittyvä insuliini. Toisaalta insuliini- vasta-ainekompleksien ei-toivottu dissosiaatio voi johtaa hyperinsulinemiaan ja hypoglykemiaan sikiössä tai vastasyntyneessä. Osoitettiin, että siirtyminen naudan / sian insuliinivalmisteista monokomponentteihin valmisteisiin liittyy vasta-ainetiitterin vähenemiseen. Tältä osin raskauden aikana on suositeltavaa käyttää vain ihmisinsuliinivalmisteita.

Insuliinianalogit (kuten muut äskettäin kehitetyt aineet) on määrätty varoen raskauden aikana, vaikka ei ole luotettavia todisteita haittavaikutuksista. FDA: n (elintarvike- ja lääkevirasto) yleisesti hyväksyttyjen suositusten mukaisesti, jotka määrittävät mahdollisuuden käyttää lääkkeitä raskauden aikana, sikiöön vaikuttavat insuliinivalmisteet kuuluvat luokkaan B (eläinten lisääntymistä koskeva tutkimus ei osoittanut haitallista vaikutusta sikiöön eikä riittäviä ja tiukasti kontrolloituja tutkimuksia raskaana oleville naisille naisille ei tehty) tai C-luokkaan (eläinten lisääntymistutkimukset osoittivat haittavaikutuksia sikiöön, ja riittäviä ja hyvin kontrolloituja tutkimuksia raskaana olevilla naisilla ei tehty, mutta mahdolliset hyödyt, jotka liittyvät huumeiden käyttöön raskaana olevilla naisilla, voivat perustella sen käyttöä mahdollisesta riskistä huolimatta). Lizpro-insuliini kuuluu siis luokkaan B ja aspartinsuliini ja glargiininsuliini - luokkaan C.

Insuliinihoidon komplikaatiot. Hypoglykemia. Liian suurten annosten käyttöönotto sekä hiilihydraattien saannin puuttuminen ruoan kanssa voivat aiheuttaa ei-toivotun hypoglykemisen tilan, hypoglykeminen kooma voi kehittyä tajunnan menetyksen, kouristusten ja sydämen toiminnan masennuksen myötä. Hypoglykemia voi kehittyä myös lisäkertoimien vaikutuksesta, jotka lisäävät insuliinin herkkyyttä (esim. Lisämunuaisen vajaatoiminta, hypopituitarismi) tai lisäävät glukoosin imeytymistä (liikunta).

Hypoglykemian varhaiset oireet, jotka liittyvät pitkälti sympaattisen hermoston aktivoitumiseen (adrenergiset oireet), ovat takykardia, kylmä hiki, vapina, parasympaattisen järjestelmän aktivoituminen - vakava nälkä, pahoinvointi ja huulien ja kielen pistely. Hypoglykemian ensimmäisessä merkissä on ryhdyttävä kiireellisiin toimenpiteisiin: potilaan tulee juoda makeaa teetä tai syödä muutama sokeria. Hypoglykeemisessä koomassa injektoidaan laskimoon 40% glukoosiliuosta, jonka määrä on 20–40 ml tai enemmän, kunnes potilas lähtee komatista tilasta (yleensä enintään 100 ml). Hypoglykemia voidaan poistaa myös glukagonin intramuskulaarisesti tai subkutaanisesti.

Kehon painon kasvu insuliinihoidon aikana liittyy glukosurian eliminointiin, ruoan todellisen kaloripitoisuuden lisääntymiseen, ruokahalun lisääntymiseen ja lipogeneesin stimulointiin insuliinin vaikutuksesta. Jos noudatat ravitsemusperiaatteita, tämä sivuvaikutus voidaan välttää.

Nykyaikaisen erittäin puhdashormonilääkkeiden (erityisesti geneettisesti muokattujen ihmisinsuliinivalmisteiden) käyttö johtaa suhteellisen harvoin insuliiniresistenssin ja allergioiden kehittymiseen, mutta tällaisia ​​tapauksia ei suljeta pois. Akuutin allergisen reaktion kehittyminen vaatii välitöntä herkistävää hoitoa ja lääkkeen korvaamista. Kun kehitetään reaktiota naudan / sian insuliinivalmisteisiin, ne on korvattava ihmisinsuliinivalmisteilla. Paikalliset ja systeemiset reaktiot (kutina, paikallinen tai systeeminen ihottuma, ihonalaisten kyhmyjen muodostuminen pistoskohdassa) liittyvät insuliinin riittämättömään puhdistukseen epäpuhtauksista tai naudan tai sian insuliinin avulla, jotka eroavat toisistaan ​​aminohapposekvenssissä ihmisestä.

Yleisimmät allergiset reaktiot ovat iho, IgE-välitteiset vasta-aineet. Joskus havaitaan systeemisiä allergisia reaktioita sekä IgG-vasta-aineiden välittämää insuliiniresistenssiä.

Näön hämärtyminen Silmän taittumisen ohimeneviä häiriöitä esiintyy insuliinihoidon alussa ja ne häviävät itsestään 2-3 viikon kuluessa.

Turvotusta. Hoidon ensimmäisinä viikkoina esiintyy myös ohimenevää jalkojen turvotusta, joka johtuu nesteen kertymisestä, ns. insuliinin turvotusta.

Paikallisia reaktioita ovat lipodystrofia toistuvien injektioiden kohdalla (harvinainen komplikaatio). Annetaan lipoatrofiaa (ihonalaisen rasvan häviäminen) ja lipohypertrofiaa (ihonalaisen rasvan lisääntyminen). Näillä kahdella valtiolla on erilainen luonne. Lipoatrofia - immunologinen reaktio, joka johtuu pääasiassa huonosti puhdistettujen eläinperäisten insuliinivalmisteiden antamisesta, ei ole nyt käytännössä löydetty. Lipohypertrofia kehittyy käytettäessä erittäin puhdistettuja ihmisen insuliinivalmisteita, ja se voi tapahtua, jos injektiotekniikka on häiriintynyt (kylmävalmistus, alkoholi ihon alle) ja myös itse valmisteen anabolisten vaikutusten vuoksi. Lipohypertrofia luo kosmeettisen vian, joka on potilaiden ongelma. Lisäksi tämän vian takia lääkkeen imeytyminen on heikentynyt. Lipohypertrofian kehittymisen estämiseksi on suositeltavaa muuttaa jatkuvasti saman alueen injektiokohtia ja jättää vähintään 1 cm kahden pistoksen väliin.

Saattaa olla paikallisia reaktioita, kuten kipua antamispaikassa.

Vuorovaikutusta. Insuliinivalmisteet voidaan yhdistää toisiinsa. Monet lääkkeet voivat aiheuttaa hypo- tai hyperglykemiaa tai muuttaa diabetes mellituksen potilaan hoitoa hoitoon. Sinun tulisi harkita vuorovaikutusta, joka on mahdollista, kun insuliinia käytetään samanaikaisesti muiden lääkkeiden kanssa. Alfa-salpaajat ja beeta-adrenomimetiki lisäävät endogeenisen insuliinin eritystä ja lisäävät lääkkeen vaikutusta. Insuliinin hypoglykeemistä vaikutusta tehostavat oraaliset hypoglykeemiset aineet, salisylaatit, MAO: n estäjät (mukaan lukien furatsolidoni, prokarbatsiini, selegiliini), ACE: n estäjät, bromokriptiini, oktreotidi, sulfanilamidit, anaboliset steroidit (erityisesti oksandroloni, metandienoni) ja terapeutit ja terapeutit sekä apua näiden hoitojen ja hoitojen sekä sulfidien, anabolisten steroidien, anabolisten steroidien avulla. glukagoniin, joka johtaa hypoglykemiaan, erityisesti insuliiniresistenssin tapauksessa, ehkä insuliinin annosta pienennetään), somatostatiinianalogeja, guanetidiinia, dizo pyramidit, klofibraatti, ketokonatsoli, litiumvalmisteet, mebendatsoli, pentamidiini, pyridoksiini, propoksifeeni, fenyylibutatsoni, fluoksetiini, teofylliini, fenfluramiini, litiumvalmisteet, kalsiumvalmisteet, tetrasykliinit. Klorokiini, kinidiini, kiniini vähentävät insuliinin hajoamista ja voivat lisätä insuliinin pitoisuutta veressä ja lisätä hypoglykemian riskiä.

Karboanhydraasin estäjät (erityisesti asetatsolamidi) stimuloivat haiman β-soluja, edistävät insuliinin vapautumista ja lisäävät reseptorien ja kudosten herkkyyttä insuliinille; vaikka näiden lääkkeiden samanaikainen käyttö insuliinin kanssa voi lisätä hypoglykeemistä vaikutusta, vaikutus voi olla arvaamaton.

Useat lääkkeet aiheuttavat hyperglykemiaa terveillä ihmisillä ja pahentavat taudin kulkua diabeetikoilla. Insuliinin hypoglykeeminen vaikutus heikkenee: antiretroviraaliset lääkkeet, asparaginaasi, suun kautta otettavat hormonaaliset ehkäisyvalmisteet, glukokortikoidit, diureetit (tiatsidi, etakryiinihappo), hepariini, H-antagonistit2-reseptorit, sulfiinipiratsoni, trisykliset masennuslääkkeet, dobutamiini, isoniatsidi, kalsitoniini, niatsiini, sympatomimeetit, danatsoli, klonidiini, BKK, diatsoksidi, morfiini, fenytoiini, somatotropiini, kilpirauhashormonit, fenotiatsiinijohdannaiset, nikotiini, etanoli, etanoli, fenotiini, somatotropiini, kilpirauhashormonit, fenotiatsiinijohdannaiset, nikotiini, etanoli

Glukokortikoideilla ja epinefriinillä on päinvastainen vaikutus insuliiniin perifeerisissä kudoksissa. Siten systeemisten glukokortikoidien pitkäaikainen antaminen voi aiheuttaa hyperglykemiaa jopa diabetes mellitukseen (mukaan lukien steroidi-diabetes), joka voi esiintyä noin 14%: lla potilaista, jotka käyttävät systeemisiä kortikosteroideja usean viikon ajan tai pitkäaikaisesti paikallisia kortikosteroideja. Jotkut lääkkeet estävät insuliinin erittymistä suoraan (fenytoiini, klonidiini, diltiatseemi) tai vähentämällä kaliumvarannot (diureetit). Kilpirauhashormonit nopeuttavat insuliinin metaboliaa.

Merkittävimmät ja usein vaikuttavat beetasalpaajien, oraalisten hypoglykeemisten aineiden, glukokortikoidien, etanolin, salisylaattien toimintaan.

Etanoli estää glukoneogeneesiä maksassa. Tätä vaikutusta havaitaan kaikissa ihmisissä. Tässä yhteydessä on pidettävä mielessä, että alkoholijuomien väärinkäyttö insuliinihoidon taustalla voi johtaa vakavan hypoglykeemisen tilan kehittymiseen. Pienet määrät ruokaa, jota käytetään ruoan kanssa, eivät yleensä aiheuta ongelmia.

Beetasalpaajat voivat estää insuliinin eritystä, muuttaa hiilihydraattien metaboliaa ja lisätä perifeeristä resistenssiä insuliinille, mikä johtaa hyperglykemiaan. Ne voivat kuitenkin myös estää katekoliamiinien vaikutusta glukoogeneesiin ja glykogenolyysiin, joka liittyy vakavien hypoglykeemisten reaktioiden riskiin diabeetikoilla. Lisäksi mikä tahansa beeta-adrenergisista salpaajista voi peittää adrenergiset oireet, jotka johtuvat veren glukoosipitoisuuden vähenemisestä (mukaan lukien vapina, sydämentykytys), mikä häiritsee potilaan ajoissa tunnistamista hypoglykemiasta. Selektiivinen beeta1-adrenergiset estäjät (mukaan lukien acebutololi, atenololi, betaksololi, bisoprololi, metoprololi) osoittavat näitä vaikutuksia vähemmän.

Tulehduskipulääkkeet ja suuriannoksiset salisylaatit estävät prostaglandiini E: n synteesiä (joka inhiboi endogeenisen insuliinin erittymistä) ja siten lisäävät insuliinin peruseritystä, lisäävät haiman β-solujen herkkyyttä glukoosiin; hypoglykeeminen vaikutus samanaikaisen käytön yhteydessä saattaa edellyttää NSAID-lääkkeiden tai salisylaattien ja / tai insuliinin annoksen muuttamista, erityisesti pitkäaikaisessa jakamisessa.

Merkittävää määrää insuliinivalmisteita valmistetaan parhaillaan. johdettu eläinten haimasta ja syntetisoitu geenitekniikalla. Insuliinihoidon valinnaiset valmisteet ovat geneettisesti muokattuja erittäin puhdistettuja ihmisen insuliineja, joilla on minimaalinen antigeenisyys (immunogeeninen aktiivisuus) sekä ihmisinsuliinin analogit.

Insuliinivalmisteita valmistetaan lasipulloissa, jotka on hermeettisesti suljettu kumitulpilla, joissa on alumiinia, erityisessä ns. insuliiniruiskut tai ruiskun kynät. Kun käytät ruiskun kynää, valmisteet ovat erityisissä injektiopullon patruunoissa (penfill).

Insuliinin intranasaalisia muotoja ja suun kautta annettavia insuliinivalmisteita kehitetään. Kun insuliini on yhdistetty detergenttiin ja annostelu aerosolin muodossa nenän limakalvoon, tehokas plasmataso saavutetaan yhtä nopeasti kuin IV-bolusannostuksella. Intranasaalisia ja oraalisia insuliinivalmisteita kehitetään tai tehdään kliinisissä tutkimuksissa.